末端轉(zhuǎn)移酶/末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶/胸腺五肽/TDT

英文名稱：TDT；Terminal Transferase；Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
其他名稱：末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶

CAS號：9027-67-2
分子量：60000

級別：BR
來源：大腸桿菌細(xì)胞，含有編碼牛胸腺末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶的基因
濃度：20u/ul
活性定義：是指在37℃、60分鐘內(nèi)將1nmol脫氧核糖核酸摻入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量
酶活性分析混合物：66mM二甲胂酸鉀（PH7.2），1mM CoCL2, 0.01%（v/v） Triton X-100, 10uM oligo（dT）10, 1mM dTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP
保存液組分：100mM 醋酸鉀（PH6.8）、2mM β-巰基乙醇，0.01%（v/v） Triton X-100和50%（v/v）甘油
5×反應(yīng)緩沖液：1M 二甲胂酸鉀、125mM Tris，0.05%（v/v） Triton X-100，5mM CoCL2（PH7.2,25℃）
抑制劑：金屬螯合劑、銨、氯化物、碘化物和磷酸鹽離子
失活：加入EDTA，70℃加熱10分鐘
質(zhì)量保證：測試表明無內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
注意：由于含有CoCL2，TdT反應(yīng)緩沖液不能與下游應(yīng)用兼容，需采用柱離心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法純化反應(yīng)混合物，除去CoCL2
性狀：懸浮液，重組酶。末端轉(zhuǎn)移酶（Terminal transferase, TdT）是一種無需模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3'羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為TdT的底物。一般操作是：先在載體上打開一單個位點(diǎn)，把它與末端轉(zhuǎn)移酶和某一dNTP（如dATP）一起保溫以使添尾，另一待插入的外源DNA片段則用互補(bǔ)的用同法添dNTP（dTTP）用同法添尾。接著使上述兩種都接上互補(bǔ)單鏈尾的DNA片段彼此退火，使形成一雜合載體來轉(zhuǎn)化受體菌。雜合載體中的裂隙或切口可被受全菌所修復(fù)。
用途：生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物；DNA的3'末端標(biāo)記
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