BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒

規(guī)格:50ml/100ml，價(jià)格：125/235元，產(chǎn)品簡(jiǎn)介

BCA蛋白濃度測(cè)定法是***的蛋白濃度檢測(cè)方法之一， BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。本試劑盒測(cè)定蛋白濃度靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25µg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5µg，待測(cè)樣品體積為1-20µl。在50-2000µg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。而且不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。

試劑盒組份

組   份（50ml）（100ml） 存儲(chǔ)溫度

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 5μg/μL ） 5 mL 10 mL -20℃

BCA試劑A 50 mL 100 mL 4℃

BCA試劑B 1 mL 2 mL 4℃

試劑盒以外自備儀器和試劑

可調(diào)移液器、1.5m L離心管或96孔板、渦旋振蕩器、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)（測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm最佳）。

操作步驟

A、普通分光光度計(jì)操作  1、 估計(jì)樣品蛋白的濃度范圍，并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。

管號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8（…樣品）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） 0 5 10 20 40 60 80 100 0

去離子水（μL） 100 95 90 80 60 40 20 0 100－X

樣品（μL） 0 0 0 0 0 0 0 0 X

BCA工作液（μL） 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000

對(duì)應(yīng)蛋白含量（μg） 0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 待測(cè)3、 取若干個(gè)帶蓋的1.5 mL離心管，編好號(hào)后，按下表加入試劑： 4、 各管充分混勻，37℃放置30分鐘，然后以0號(hào)管做參比在562nm下比色測(cè)定，記錄各管的吸光值。根據(jù)管號(hào)1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量（μg）， 除以加入樣品的體積（XμL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度。 B、酶標(biāo)板操作1、 估計(jì)樣品蛋白的濃度范圍，并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。3、 取一塊酶標(biāo)板，按照下表加入試劑：

孔號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8（…樣品）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20 0

去離子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0 20－X

樣品（μL） 0 0 0 0 0 0 0 0 X

BCA工作液（μL） 200 200 200 200 200 200 200 200 200

對(duì)應(yīng)蛋白含量（μg） 0 5 10 20 40 .0 80 100 待測(cè) 4、 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘再次振蕩，然后以0號(hào)孔在562nm下用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色測(cè)定。記錄各孔的吸光值。根據(jù)孔號(hào)1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量（μg）， 除以加入樣品的體積（XμL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度。

保存條件

蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液-20℃保存，BCA試劑A 和BCA試劑B 4℃保存，一年有效。

注意事項(xiàng)

1、 BCA試劑A 和BCA試劑B使用前請(qǐng)顛倒3-5次，混勻。2、 配制好的混合BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。3、 加入BCA工作液后，也可以在室溫放置2小時(shí)測(cè)定。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。實(shí)驗(yàn)中可對(duì)作用溫度和作用時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。4、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液請(qǐng)?jiān)谑褂们跋然靹?，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白?biāo)準(zhǔn)。5、 比色應(yīng)在2h內(nèi)完成。6、 請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。