ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒

規(guī)格:50ml/100ml，價(jià)格：140/245元，產(chǎn)品簡(jiǎn)介

ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒用于Western blot的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，比DAB顯色的靈敏度至少高50倍，可達(dá)ng水平。原理是采用新型發(fā)光底物（Luminol），可與二抗上耦連的辣根過(guò)氧化物酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出熒光，從而可以通過(guò)用X光片壓片或其它適當(dāng)熒光成像設(shè)備檢測(cè)樣品。在電泳的過(guò)程中，將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)SDS-PAGE分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如PVDF、NC）等，經(jīng)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗與膜上的蛋白直接反應(yīng)。當(dāng)加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑后，Luminol發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長(zhǎng)為428nm的光，此光可經(jīng)X光片（放射自顯影片）感光記錄下來(lái)。

試劑盒組份

存儲(chǔ)溫度

A液 （避光） 25 mL      50mL 4℃

B 液 25 mL 50mL 4℃

試劑盒以外自備儀器和試劑

鑷子，1.5ml離心管，X光片，暗盒，顯影液，定影液、去離子水

操作步驟

1、 按照常規(guī)的Western實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作到二抗孵育和洗滌后的膜待用。2、 ECL工作液的配制：        取1.5ml的eppendorf管，加入500μL A液和500μL B 液，混勻后即為ECL工作液（配制后請(qǐng)盡快使用）。3、 用平頭鑷將膜取出，用吸水紙略吸去過(guò)多的液體(切勿接觸膜的蛋白面)，然后置于一潔凈保鮮膜上。4、 根據(jù)膜的大小，按每10平方厘米膜加1ml ECL工作液的比例，滴加ECL工作液到膜上，確保使工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-2分鐘。         5、取膜，棄ECL工作液，用吸水紙略吸去過(guò)多的液體。將膜放在兩片保鮮膜中間，小心趕盡氣泡。          6、將膜固定于片夾內(nèi)。暗室內(nèi)壓片1分鐘，立即顯影定影，根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間。或直接分別壓片30秒，1，3，5分鐘，然后一起顯影定影觀察結(jié)果。

保存條件

4℃避光保存，一年有效。

注意事項(xiàng)

1、 A液和B液在吸取過(guò)程中必須要更換槍頭，A液和B液相互污染后會(huì)導(dǎo)致A液或B液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。2、 各溶液使用后，請(qǐng)蓋緊瓶蓋，以防失效。特別是B液，含有氧化劑，比較容易被還原而失效。3、 A液和B液均對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。