基于特異性抗體的沙門菌病免疫學(xué)檢測(cè)方法

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隨著抗體制備技術(shù)的不斷進(jìn)步，特別淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的出現(xiàn)，使得研究人員能夠制備出高品質(zhì)的抗沙門菌菌體或鞭毛抗原的屬特異性抗體，用以建立一些快速的檢測(cè)方法。已建立的沙門菌免疫學(xué)檢測(cè)方法有許多種，大致可分為以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、放射免疫試驗(yàn)為基礎(chǔ)的方法及其他多種以抗體為基礎(chǔ)，利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴(kuò)散及免疫色譜技術(shù)的方法。
（1）免疫酶技術(shù) 在實(shí)踐中，ELISA作為一種沙門菌檢測(cè)的高敏感性檢測(cè)技術(shù)，由于其安全性、簡(jiǎn)便性等方面的優(yōu)點(diǎn)，使其在臨床檢驗(yàn)以及科研中被廣泛應(yīng)用。
文其乙等應(yīng)用王志亮研制的沙門菌屬特異性單抗CB8和de7建立了檢測(cè)沙門菌的直接ELISA方法，即用被檢樣品直接包被酶標(biāo)板，固定后加酶標(biāo)屬特異性單抗，作用一定時(shí)間后，加入底物呈色后終止反應(yīng)。目前已成功地應(yīng)用于蛋品、鮮奶、肉晶中沙門菌的檢測(cè)，該方法與傳統(tǒng)方法相比，敏感性和特異性均達(dá)到理想效果。
抗原捕獲ELISA是用特異性的單克隆抗體包被酶標(biāo)板，加人待檢樣品，是樣品中的抗原捕獲抗體的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的檢測(cè)技術(shù)。Riad等用此方法對(duì)66份牛糞樣品進(jìn)行鼠傷寒沙門菌檢測(cè)，被檢樣品中24．2％為陽性，與直接ELISA方法19．7％的陽性檢出率相比，更加靈敏。
目前，國外開發(fā)出一種沙門菌自動(dòng)酶標(biāo)免疫檢測(cè)儀，其原理是用酶熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗后，通過激發(fā)光源檢測(cè)，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽性標(biāo)本，其對(duì)沙門菌的檢測(cè)的結(jié)果比較穩(wěn)定，已先后被美國FDA、AOAC、USDA等部門認(rèn)可。
（2）免疫熒光技術(shù) 用于快速檢測(cè)細(xì)菌的熒光抗體技術(shù)主要有直接法和間接法。直接法是在檢測(cè)樣品上直接滴加已知特異性熒光標(biāo)記的抗血清，經(jīng)洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。間接法是在檢樣上滴加已知的細(xì)菌特異性抗體，作用后經(jīng)洗滌，再加入熒光標(biāo)記的第二抗體。
孫洋等利用吖啶橙標(biāo)記沙門菌屬特異性抗血清，用吖啶橙免疫熒光菌團(tuán)培養(yǎng)法檢測(cè)沙門菌，證明該檢測(cè)方法與枯草桿菌、大腸埃希桿菌等八種雜菌均不形成菌團(tuán)交叉，與雜菌的濃度比在1：640內(nèi)均不受干擾，在30h內(nèi)即可獲得結(jié)果?？s短了檢測(cè)時(shí)間，而且具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn)。Cloak等將待檢樣品吸附于玻璃斜面的一種薄膜上，然后用免疫熒光顯微鏡進(jìn)行結(jié)果判定，該方法可檢測(cè)到1Xl03個(gè)／ml。
（3）免疫膠體金技術(shù) 免疫金滲濾法是20世紀(jì)90年代初期發(fā)展起來的以膠體金為標(biāo)記物的簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法，它綜合了膠體金自身顯色、與蛋白質(zhì)物理吸附而不影響吸附分子的生物活性、性質(zhì)穩(wěn)定等一系列優(yōu)點(diǎn)，以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可濾過性使抗原—抗體反應(yīng)和洗滌在這一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過膜的方式，迅速完成，簡(jiǎn)化了操作步驟，縮短了檢測(cè)的時(shí)間。
曹春梅等利用針對(duì)沙門菌09抗原單克隆抗體和膠體金標(biāo)記親和純化的羊抗鼠IgG，建立了一種以微孔濾膜為固相載體，快速檢測(cè)沙門菌09抗原的斑點(diǎn)免疫金滲濾法。沙門菌點(diǎn)膜，加入單抗，洗滌后再加入膠體金標(biāo)記的羊抗鼠IgG，陽性結(jié)果呈紅色圓點(diǎn)，陰性結(jié)果無顏色整個(gè)檢測(cè)過程僅需10min。腸炎沙門菌標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)定該方法靈敏度為6X104CFU／點(diǎn)。該方法可檢測(cè)所有已知含09抗原的沙門菌，而不與其他沙門菌、腸桿菌科其他細(xì)菌和常見革蘭陽性細(xì)菌反應(yīng)。
（4）免疫色譜技術(shù) 的沙門菌免疫學(xué)快速檢測(cè)，利用經(jīng)特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎(chǔ)。幾滴樣品加到卡片上，結(jié)果可以直接用肉眼讀出。免疫色譜卡片極易操作，且由于不需要特殊設(shè)備，很適合小型實(shí)驗(yàn)室使用。盡管卡片檢測(cè)法與·ELISA法一樣需要對(duì)樣品進(jìn)行增菌處理，但卡片法檢測(cè)耗時(shí)不超過10rain。
（5）乳膠凝集技術(shù) 將特異性的抗體包被在乳膠顆粒表面，通過抗體與相應(yīng)的沙門菌抗原結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。通常此法需獲得細(xì)菌的純培養(yǎng)物，再將培養(yǎng)物與致敏乳膠反應(yīng)。目前FDA認(rèn)可的產(chǎn)品有Bactigen、Spectate、Microscreen、Serobact等。