豬繁殖與呼吸綜合征病原檢測

診斷時(shí)zui重要的步驟是選擇合適的樣品，這樣才能獲得有用的實(shí)驗(yàn)室資料。一般來講，從幼豬而非大豬中采集樣品，因?yàn)樵谟棕i中的PRRSV的數(shù)量多，持續(xù)時(shí)間長。感染后4—6周能從乳豬、斷奶仔豬或架子豬的血清中分離血清。病毒分離用的樣品在采集后迅速冷藏或凍貯，因?yàn)镻RRSV對病毒很敏感，在運(yùn)輸過程中必須注意溫度不能升高，否則PRRSV易被滅活而不能進(jìn)行病毒分離。此外，病毒對pH的穩(wěn)定性范圍很小，因此必須保證無菌環(huán)境，以避免細(xì)菌污染而導(dǎo)致pH改變。樣品必須用絕緣和防漏的容器包裝，有足夠的冷凍劑，迅速遞送到相關(guān)實(shí)驗(yàn)室對PRRS的病毒學(xué)診斷比較困難，這主要由于分離病毒需要選用豬肺泡巨噬細(xì)胞，這種細(xì)胞來自6～8周齡的豬，并且是無特定病原體豬（SPF）這種豬不是所有實(shí)驗(yàn)室都可以方便得到的。一般的傳代細(xì)胞系對該病毒的易感性差，不能*替代肺泡巨噬細(xì)胞。某些猴腎細(xì)胞系（MARC-145）能較好的替代巨噬細(xì)胞，但不支持所有的分離物，尤其是對歐洲型毒株。

鑒定PRRSV的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)還有免疫組化和免疫熒光方法，其中以肺和扁桃體組織用于檢測效果較好，這兩種方法比用病毒分離方法更迅速且無需細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施。免疫組化法可以對用福爾馬林固定的組織塊病毒鑒定，并能對病毒進(jìn)行溯源性分析，但這兩種方法的正確性受操作人員的技巧影響很大，再經(jīng)病毒分離或PCR鑒定應(yīng)用原位雜交法能檢測和區(qū)別PRRS病毒北美洲基因型及歐洲株基因型，但它主要用于研究，并不適于實(shí)驗(yàn)室診斷。

反轉(zhuǎn)錄—聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT—PCR）以及套式PCR法檢測病毒RNA的敏感性很高，當(dāng)病毒分離困難時(shí)很有用，如測定精液或病毒因?yàn)樽匀芏糠纸到?。在豬的急性感染中，PCR與常規(guī)病毒分離同等敏感，在感染的康復(fù)階段比病毒分離更為敏感。自動化的PCR試驗(yàn)不易發(fā)生污染，為診斷實(shí)驗(yàn)室提供敏感而特異的試驗(yàn)，而且費(fèi)用大為下降?，F(xiàn)在已廣泛用于包括血清在內(nèi)的多種組織的檢測；現(xiàn)已發(fā)展了多種PCR診斷技術(shù)，其中嵌套式PCR比普通PCR提供了更高的敏感性，多重PCR可以用于區(qū)別北美型和歐洲型PRRS病毒分離株；現(xiàn)在更新的熒光定量RT—PCR技術(shù)也已經(jīng)用于組織或血清樣本中PRRSV的定性和定量檢測。通過這些分子生物學(xué)的方法，我們可以在難以進(jìn)行病毒分離的情況下快速準(zhǔn)確地檢測病原。zui近，開發(fā)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性分析的方法，可用于PRRS野毒株以及疫苗分離株的分子流行病學(xué)檢測。